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尿液干化學(xué)分析技術(shù)

2020/6/2 11:45:24

 

隨著尿分析儀的普及,其簡(jiǎn)單、快捷的優(yōu)點(diǎn)被人們所接受,但由于試紙帶在測(cè)定過(guò)程中易受尿液中化學(xué)因素的干擾,現(xiàn)將尿液分析試紙?jiān)砗团R床進(jìn)行全面分析。報(bào)告如下: 
  一、葡萄糖: 
  1、反應(yīng)原理:采用酶法測(cè)試,用兩種酶,分別是葡萄糖氧化酶和過(guò)氧化氫酶。主要反應(yīng)過(guò)程如下:
現(xiàn)階段,所有的試紙都是采用酶法,因?yàn)槊阜ㄏ啾容^于以前的各種方法具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、反應(yīng)所需時(shí)間短等最大的優(yōu)越性。不同型號(hào)的試紙所選用的指示劑有所不同。
  2、臨床意義
  a、生理性糖尿?yàn)橐贿^(guò)性糖尿,是暫時(shí)性的,排除生理因素后恢復(fù)正常。主要有三種:①飲食性糖尿,即在短時(shí)間內(nèi)服用大量糖類,引起血糖濃度過(guò)大;②應(yīng)急性糖尿,在腦外傷、腦血管意外、情緒激動(dòng)、劇烈運(yùn)動(dòng)周期性四肢麻痹等情況下,延腦糖中樞受刺激,使腎上腺激素或胰島素分泌異常,可出現(xiàn)暫時(shí)性的糖尿;③妊娠中后期多可見糖尿。
  b、病理性糖尿也可分為三種:①真性糖尿,既胰島素的分泌量相對(duì)或絕對(duì)不足,使血糖濃度超過(guò)腎糖閾尿糖檢查不僅可以診斷糖尿病,還可以指導(dǎo)臨床醫(yī)生決定胰島素的用量、判斷療效;②腎性糖尿,即腎小管對(duì)葡萄糖的重吸收功能減退,新生兒的近曲小管功能未完善也能出現(xiàn)糖尿;③其他糖尿,如生長(zhǎng)激素過(guò)多(肢端肥大癥)、甲狀腺激素過(guò)多(甲亢)、腎上腺激素過(guò)多(嗜鉻細(xì)胞瘤)、皮質(zhì)醇(Cushing綜合癥)、胰高血糖素等都可使血糖濃度高過(guò)腎糖閾而出現(xiàn)糖尿;另外,肥胖病、高血壓也可能出現(xiàn)糖尿。 
  3、注意事項(xiàng)
  a、因?yàn)槟蛱欠治鲈嚰埖暮笠徊椒磻?yīng)是氧化還原反應(yīng),當(dāng)尿液中含有比色素還原能力更強(qiáng)的物質(zhì)時(shí),可使測(cè)試結(jié)果偏低甚至出現(xiàn)假陰性。如尿液中含有維生素C時(shí)就能使測(cè)試結(jié)果偏低甚至假陰性。
  b、抗生素對(duì)班氏定糖法糖定性、糖定量測(cè)定結(jié)果都有一定的影響,而對(duì)干化學(xué)法的測(cè)試結(jié)果無(wú)影響。尿液存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)也能使尿糖被細(xì)菌分解使?jié)舛认陆?,但含有抗生素時(shí)幾乎不下降。
  c、高濃度的酮體尿可引起假陰性;尿液比重增高,可降低試劑帶對(duì)尿糖的敏感性;服用大量左旋多巴時(shí),該藥物的代謝產(chǎn)物會(huì)對(duì)測(cè)試反應(yīng)產(chǎn)生抑制作用,使測(cè)試結(jié)果偏低或出現(xiàn)假陰性;尿液被過(guò)氧化物或次氯酸鹽等強(qiáng)氧化性物質(zhì)污染的時(shí)候能出現(xiàn)假陽(yáng)性。
  d、試劑帶采用的使酶促反應(yīng),測(cè)定的結(jié)果和溫度及時(shí)間有關(guān),因此應(yīng)在規(guī)定的溫度和時(shí)間內(nèi)測(cè)定。 
  二、膽紅素、尿膽原 
  1、膽紅素反應(yīng)原理:在酸性條件下,重氮鹽作用于膽紅素的中央,使其斷開并與重氮鹽偶合形成2分子的偶氮膽紅素,從而產(chǎn)生顏色變化。 
  2、尿膽原的反應(yīng)原理:尿膽原分析試紙的反應(yīng)原理一般有兩種,一種是尿膽原在酸性條件下與對(duì)-二甲氨基苯甲醛發(fā)生醛化反應(yīng)(即尿膽原與醛縮合生成紅色的縮醛化合物,既常見的歐氏試劑)。另一種是重氮鹽法,即尿膽原在酸性條件下,與重氮鹽偶聯(lián)生成紫紅色的偶氮化合物。 
  3、臨床意義:
  a、膽紅素的檢測(cè)對(duì)肝膽系統(tǒng)疾病的診斷有重要價(jià)值。尿膽原更加靈敏的反映肝功能
  b、膽紅素的檢測(cè)有助于診斷黃疸。在敗血癥、蠶豆病、異型輸血等情況下使紅細(xì)胞大量破壞,產(chǎn)生溶血性黃疸,此時(shí)雖然膽紅素大量增加,但大部分是間接膽紅素,因此,尿中的膽紅素還是陰性。
  c、膽素原族的檢測(cè)可以敏感的反映肝細(xì)胞功能,臨床經(jīng)驗(yàn)表明,在病毒性肝炎早期未出現(xiàn)黃疸前,尿中的膽素原族就已經(jīng)明顯增加。與膽紅素結(jié)合可以為診斷黃疸的類型提供依據(jù)。黃疸大致可分為三類:①肝前性黃疸,或稱溶血性黃疸,②肝原性黃疸,或稱肝細(xì)胞性黃疸,是在感染(如病毒性肝炎)、中毒及肝硬化等情況下,肝細(xì)胞或肝內(nèi)毛細(xì)膽管大量病變,使肝細(xì)胞對(duì)膽紅素?cái)z取、結(jié)合、轉(zhuǎn)運(yùn)及排泄障礙所致;③肝后性黃疸,或稱梗阻性黃疸,由于結(jié)石、腫瘤或先天性膽道閉鎖等原因造成總膽管梗阻所致。 
  4、注意事項(xiàng)
  a、標(biāo)本必須新鮮,以免膽紅素被氧化成膽綠素,強(qiáng)烈的陽(yáng)光會(huì)加速此反應(yīng)。放置時(shí)間長(zhǎng)可使尿膽原氧化成尿膽素。
  b、尿液中含有高濃度的維生素C或亞硝酸鹽時(shí),會(huì)抑制重氮偶合反應(yīng),可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。當(dāng)病人接受大劑量氯丙嗪治療或尿中含有鹽酸苯偶氮吡啶的代謝產(chǎn)物時(shí),可呈假陰性。
  c、由于分析試紙無(wú)尿膽原陰性的梯度,因此,分析試紙不能用來(lái)檢測(cè)尿膽原的減少或消失。
  d、尿液中的一些內(nèi)源性物質(zhì)如膽色素原、吲哚、膽紅素等,可是測(cè)試結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性;一些藥物如吩噻嗪等可產(chǎn)生顏色干擾。另外,尿液中含有大量維生素C或亞硝酸鹽時(shí),可抑制重氮偶合反應(yīng),使測(cè)試結(jié)果偏低甚至出現(xiàn)假陰性。 
  三、酮體 
  1、反應(yīng)原理:尿酮體包括乙酰乙酸、丙酮、β-羥丁酸,后者雖不屬于酮類,但經(jīng)常與前兩者伴隨出現(xiàn),因而統(tǒng)稱為酮體。反應(yīng)原理是在堿性條件下,尿中的乙酰乙酸、丙酮與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng),生成紫紅色的復(fù)合物。這種測(cè)試方法對(duì)乙酰乙酸的敏感度為5~10mg/dl,對(duì)丙酮的敏感度為40~70mg/dl,并且不與β-羥丁酸反應(yīng)。
  2、臨床意義
  a、糖尿病酮癥酸中毒。糖利用減少,脂肪分解產(chǎn)生過(guò)量酮體,尿酮體的檢查對(duì)未控制或治療不當(dāng)?shù)奶悄虿〕霈F(xiàn)酸中毒或昏迷的診斷很有價(jià)值,可以與低血糖、心腦疾病酸中毒或高血糖滲透性糖尿病昏迷相區(qū)別。
  b、感染性疾?。ㄈ绶窝住?、敗血癥、結(jié)核等發(fā)熱期),嚴(yán)重嘔吐、腹瀉,長(zhǎng)期饑餓、禁食,全身麻醉后等都可能出現(xiàn)酮尿。另外婦女孕期因妊娠反應(yīng)嘔吐多、進(jìn)食少,體脂肪代謝明顯增多,也能出現(xiàn)酮尿。
  c、氯仿、******麻醉后、磷中毒等情況也能出現(xiàn)酮尿。
  d、服用雙胍類降糖藥如降糖靈后,由于藥物抑制細(xì)胞呼吸,也可能出現(xiàn)酮尿。 
  3、注意事項(xiàng):
  a、由于尿酮體中的丙酮和乙酰乙酸都是揮發(fā)性物質(zhì);乙酰乙酸受熱易分解成丙酮;尿液被細(xì)菌污染后,酮體消失,因此,尿樣必須新鮮,檢測(cè)應(yīng)該及時(shí),以免測(cè)試結(jié)果偏低或出現(xiàn)假陰性。
  b、干化學(xué)法測(cè)定酮體時(shí)對(duì)乙酰乙酸的敏感度約是丙酮的7~10倍,因此,與其他的檢測(cè)方法存在一定的差別 
  四、SG 
  1、反應(yīng)原理:尿液比重試紙的反應(yīng)原理是離子交換法,高分子電解質(zhì)——甲基乙烯基醚和順丁烯二酸的共聚體是弱酸性(—COOH基)離子交換體,而尿液中以鹽的形式存在的電解質(zhì)(M+X-),在尿液中離解釋放出M+陽(yáng)離子(以Na+為主),與離子交換體中的氫離子置換釋放出H+離子,而H+離子使PH指示劑溴麝香草酚藍(lán)產(chǎn)生顏色變化。(顏色由綠到黃的變化) 
  2、臨床意義:尿液比重的測(cè)定可以估計(jì)腎臟濃縮功能。由于尿液比重還受年齡、飲水量、出汗等因素的影響,故多次測(cè)定比單次測(cè)定更能反映腎臟濃縮功能。 
  3、注意事項(xiàng):
  a、尿液標(biāo)本必須新鮮,不能含有強(qiáng)堿、強(qiáng)酸等物質(zhì)(如奎寧、嘧啶等藥物),這些物質(zhì)的存在都會(huì)影響尿液比重的測(cè)定。當(dāng)尿液PH大于7時(shí),應(yīng)在測(cè)定結(jié)果上加上0.005作為強(qiáng)堿尿的校正。在尿液分析儀上一般都有自動(dòng)校正功能。
  b、尿液分析試紙實(shí)際上測(cè)定是尿液中的離子濃度,尿液中的非離子化合物(如葡萄糖、造影劑等)對(duì)測(cè)定結(jié)果必然有一定的影響 
  五、BLD 
  1、反應(yīng)原理:尿液潛血分析試紙的反應(yīng)原理是利用血紅蛋白中的亞鐵血紅素的假過(guò)氧化物酶活性催化分解過(guò)氧化物,產(chǎn)生新生態(tài)的氧,氧化指示劑,使指示劑顯色,從顯色的強(qiáng)度可以得知尿液中血的濃度。 
  2、臨床意義:
  a、尿液中混有0.1%以上的血液時(shí),便呈肉眼血尿的特征,血量在此以下便只能用潛血反應(yīng)或尿沉渣鏡檢才能證明。血尿常見于尿路炎癥(急性腎炎、腎結(jié)核、尿道炎等)、結(jié)核、腫瘤,有白細(xì)胞時(shí)則表示有炎癥;蛋白陽(yáng)性、尿沉渣中有腎上皮細(xì)胞、管型等時(shí),應(yīng)考慮腎炎;特別是有紅細(xì)胞管型時(shí),是腎實(shí)質(zhì)出血的佐證。
  b、血紅蛋白尿見于發(fā)作性血紅蛋白尿癥,還見于各種中毒、感染、鏈球菌敗血癥、瘧疾(黑水熱)、灼傷、溶血性輸血反應(yīng)等情況。 
  3、注意事項(xiàng):
  a、成年女性的經(jīng)血常可引起測(cè)試結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性,因此應(yīng)采取必要的采尿措施以減少污染。
  b、分析試紙不僅可以測(cè)試紅細(xì)胞,還能測(cè)試血紅蛋白,因此,當(dāng)血紅蛋白破裂時(shí),可引起試紙測(cè)試結(jié)果與鏡檢結(jié)果的不一致,應(yīng)加以區(qū)別。
  c、尿液中含有對(duì)熱不穩(wěn)定酶、肌紅蛋白或菌尿,可引起假陽(yáng)性;尿液中含有大量維生素C時(shí),可以抑制后一步反應(yīng)的進(jìn)行,使測(cè)試結(jié)果偏低甚至出現(xiàn)假陰性,因此,測(cè)試時(shí)應(yīng)使用具有抗維生素C干擾能力的分析試紙。 
  六、PH 
  1、反應(yīng)原理:PH試紙的應(yīng)用是非常廣泛的,PH的反應(yīng)原理是基于PH指示劑法,目前,一般的尿液PH分析試紙中含有甲基紅[PH4.2(紅)~6.2(黃)],溴甲酚綠[PH3.6(黃)~5.4(綠)]溴百里香酚藍(lán)[PH6.7(黃)~7.5(藍(lán))],這些混合的酸堿指示劑適量配合可以反映尿液PH4.5~9.0的變異范圍。 
  2、臨床意義:
  正常尿液呈弱酸性,約為6.0,因食物的不同,PH的變化范圍為4.5~8.0。PH測(cè)定結(jié)果的判斷比其他實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判斷要難一些,因?yàn)槟蛞篜H的波動(dòng)幅度大而快,而正常尿和病人的尿的PH沒(méi)有明顯的差別,所以PH單獨(dú)使用的意義不大。但與其他臨床資料配合起來(lái)分析,則可成為重要的資料。 
  3.注意事項(xiàng):
  a、檢測(cè)時(shí)尿標(biāo)本必須新鮮,放置過(guò)久細(xì)菌分解尿液成分可導(dǎo)致尿液PH改變。大多數(shù)情況下,細(xì)菌分解尿素產(chǎn)生氨,使尿液呈堿性;少數(shù)情況下,細(xì)菌也分解尿液成分產(chǎn)生酸性物質(zhì),使尿液PH偏酸。
  b、當(dāng)腎臟分泌的尿液含有過(guò)多的碳酸氫鹽和碳酸緩沖對(duì)時(shí),放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),使尿液中的二氧化碳自然擴(kuò)散到空氣中,使尿液PH增高。
  c、在測(cè)定過(guò)程中,應(yīng)嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間將試劑帶浸泡尿液標(biāo)本中,浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng),尿PH 呈減低趨勢(shì)。 
  七、蛋白質(zhì) 
  1、反應(yīng)原理:蛋白誤差法,某種特定的PH指示劑陰離子受蛋白質(zhì)陽(yáng)離子吸引,進(jìn)一步電離,使指示劑的變色點(diǎn)發(fā)生改變,這種方法稱為蛋白誤差法。
  2、臨床意義:檢驗(yàn)?zāi)蛞旱鞍资桥R床尿液常規(guī)化學(xué)檢查之一,尿液蛋白試制主要檢測(cè)的是尿液中的白蛋白。正常情況下,健康成人每日排出的蛋白質(zhì)含量極少(約為30~130mg),一般的常規(guī)定性方法都不能檢測(cè)出來(lái)。一旦尿液蛋白含量>100mg/l或>150mg/24h尿,尿液蛋白質(zhì)定性實(shí)驗(yàn)便呈陽(yáng)性反應(yīng)而稱為蛋白尿。蛋白尿主要反映腎小球(管)損害及腎小球?yàn)V過(guò)率的增加。 
  3、注意事項(xiàng):
  a、尿液標(biāo)本必須新鮮,變質(zhì)的尿液會(huì)使尿液的PH值產(chǎn)生變化,或者尿液本身過(guò)酸、過(guò)堿都會(huì)影響測(cè)試結(jié)果。特別是含有奎寧、奎寧丁和嘧啶等藥物時(shí),尿液呈堿性(PH>8.0),超過(guò)了試紙本身的緩沖能力,可能出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
  b、尿液分析試紙對(duì)于白蛋白的敏感度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)其他蛋白,因此,在尿液中含有其他種類的蛋白時(shí),干化學(xué)法的測(cè)試結(jié)果可能為陰性。
  c、多種物質(zhì)(大多為藥物)對(duì)尿蛋白的測(cè)定結(jié)果都有影響,如青霉素可以使測(cè)試結(jié)果偏低甚至出現(xiàn)假陰性;季胺鹽、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、喹啉等可使試紙出現(xiàn)假陽(yáng)性;某些洗滌液污染尿液時(shí),測(cè)試結(jié)果會(huì)偏低。另外,大量飲水會(huì)稀釋尿液,可能造成漏檢。 
  八、亞硝酸鹽 
  1、反應(yīng)原理:尿液中的亞硝酸鹽與試紙塊中的對(duì)氨基苯砷酸或磺胺發(fā)生重氮化反應(yīng),生成重氮鹽,生成的重氮鹽再與試紙上的N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽或四氫苯并喹啉-3-酚偶合生成紅色的偶氮化合物(蓋氏試劑法)。 
  2、臨床意義:正常情況下,尿液亞硝酸鹽的定性實(shí)驗(yàn)一般為陰性。當(dāng)泌尿系統(tǒng)受到感染時(shí),由于細(xì)菌還原硝酸鹽生成亞硝酸鹽,因此檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,常見于大腸埃希氏菌引起的泌尿系統(tǒng)感染。尿液亞硝酸鹽檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí),預(yù)示著尿液中的細(xì)菌數(shù)量在10萬(wàn)/ml以上。 
  3、注意事項(xiàng):
  a、當(dāng)尿液中缺少硝酸鹽時(shí),即使有細(xì)菌感染也會(huì)出現(xiàn)陰性結(jié)果;尿液在體內(nèi)的留存時(shí)間太短會(huì)因?yàn)橄跛猁}來(lái)不及還原而得到陰性結(jié)果。
  b、留取標(biāo)本的樣杯必須清潔,并及時(shí)送檢,以免存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)使細(xì)菌生長(zhǎng)而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
  c、使用利尿劑后,尿中的亞硝酸鹽含量降低,可能出現(xiàn)假陰性;硝基呋喃可降低反應(yīng)的靈敏度;非那吡啶可引起假陽(yáng)性;使用抗生素后,細(xì)菌被抑制可出現(xiàn)假陰性;尿液中含有大量維生素C時(shí),也可能出現(xiàn)假陰性。
  d、高比重尿可降低測(cè)試反應(yīng)的靈敏度,尿中的亞硝酸鹽離子小于1.0mg/l時(shí),可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果。 
  九、白細(xì)胞 
  1、反應(yīng)原理:尿液中白細(xì)胞測(cè)定的反應(yīng)原理是是利用中性粒細(xì)胞內(nèi)酯酶催化水解吲哚酚酯水解,產(chǎn)生游離酚,游離酚氧化偶合或與試紙中的重氮鹽偶合而顯色。
  2、臨床意義:在各種尿路炎癥情況下,尿液中都可能出現(xiàn)白細(xì)胞。白細(xì)胞的干化學(xué)檢查可以和別的檢查項(xiàng)目一起對(duì)尿液進(jìn)行過(guò)篩檢查。
  3、注意事項(xiàng):
  a、分析試紙只與粒細(xì)胞漿內(nèi)的酯酶起作用,因此分析試紙只能測(cè)定粒細(xì)胞,不能測(cè)定淋巴細(xì)胞,在腎移植病人發(fā)生排異反應(yīng)尿中以淋巴細(xì)胞為主時(shí),會(huì)得到陰性結(jié)果,應(yīng)參考其他檢測(cè)方法,做出正確的判斷。另外,白細(xì)胞破裂后,酯酶釋放到尿液中,干化學(xué)的檢測(cè)結(jié)果還能是陽(yáng)性,而鏡檢則為陰性。
  b、尿液被甲醛污染,或含有高濃度膽紅素,或使用某些藥物時(shí)可出現(xiàn)假陽(yáng)性;尿蛋白>5g/l,或尿液中含有大劑量先鋒IV;慶大霉素等藥物時(shí),可是結(jié)果偏低或出現(xiàn)假陰性。
  c、尿液未混勻,尿儀的載物臺(tái)上有污染物等情況都會(huì)使結(jié)果產(chǎn)生偏差。 
  十、抗壞血酸 
  1、反應(yīng)原理:尿液VC試紙的反應(yīng)原理是利用VC的還原性,使氧化態(tài)的2,6-二氯酚靛酚變成還原態(tài)的2,6-二氯二對(duì)酚胺。使試紙顏色由粉紅色變成無(wú)色,顏色變化的強(qiáng)弱與尿中VC的濃度相關(guān)。
  2、臨床意義:
  a、檢測(cè)尿液中維生素的含量可以測(cè)試人體的營(yíng)養(yǎng)狀況,口服維生素C 500mg后,尿維生素C排泄量在15~57umol(3~10mg)每4h內(nèi)為正常;大于57umol(10mg)每4h為充裕;小于17umol(3mg)每4h為不足。
  b、尿液維生素C降低,常見于維生素C攝入量不足或壞血病。
  c、尿液維生素C長(zhǎng)期增高可能與腎結(jié)石形成有關(guān)。
  d、在尿液分析試紙中,VC試紙還可以判斷尿液中的VC對(duì)其他試紙的影響程度。 
  3、注意事項(xiàng):
  a、分析試紙只能測(cè)定還原性的維生素C,可能與其他檢測(cè)方法的測(cè)試結(jié)果不同。
  b、在PH>4.0時(shí),尿液中的酚和巰基化合物等內(nèi)源性物質(zhì)可干擾測(cè)試,使測(cè)試結(jié)果偏高;另外半胱氨酸、硫代硫酸鈉也干擾測(cè)試,使測(cè)試結(jié)果偏高。
  c、當(dāng)尿液中含有氧化性物質(zhì)時(shí),可氧化維生素C,使測(cè)試結(jié)果偏低。
  d、維生素C在堿性尿中極不穩(wěn)定,容易分解,因此尿標(biāo)本應(yīng)及時(shí)檢測(cè)。


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